ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。在檢測(cè)時(shí),受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗原)與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體,通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)在生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中,ELISA是一種非常常見的分析方法。其原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),由此進(jìn)行定性或定量分析。該實(shí)驗(yàn)因其靈敏度較高,特異性較好,操作較簡(jiǎn)單,可大批量操作而廣泛應(yīng)用于多種傳染性疾病的篩查工作中。而在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)的過程中,有時(shí)會(huì)遇到一種被稱為“花板”的現(xiàn)象。
“花板”現(xiàn)象,顧名思義,是指在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí),酶標(biāo)板上的反應(yīng)孔出現(xiàn)了不均勻的顏色分布,使得孔內(nèi)的顏色看起來(lái)像是“花”一樣。所謂“花板”,就是空白、陰性、陽(yáng)性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻偏高,弱陽(yáng)性結(jié)果較多。這一現(xiàn)象的出現(xiàn),影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,往往是由于實(shí)驗(yàn)過程中的某些操作不當(dāng)或試劑的問題所導(dǎo)致的。對(duì)“花板”現(xiàn)象進(jìn)行了分析和總結(jié),認(rèn)為花板原因大多在樣品,解決辦法主要在洗滌,孵育和顯色過程也會(huì)導(dǎo)致。
免疫熒光試驗(yàn)(immunofluorescence test)一種免疫標(biāo)記技術(shù)。用于檢測(cè)相應(yīng)抗原或抗體。即用熒光素與抗體連接成熒光抗體,再與待檢標(biāo)本中的抗原反應(yīng),置熒光顯微鏡下觀察,抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光,借此對(duì)標(biāo)本中的抗原進(jìn)行鑒定或定位。
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